آنالیز مولکولی تاثیر سورفکتین باکتری bacillus subtilis بر روی فیتو پلاسما عامل بیماری جاروی جادوگر لیمو ترش candidatus" phytoplasma aurantifolia"

لیمو ترش جزو میوه های گرمسیری و نیمه گرمسیری بوده و از محصولات مهم و اقتصادی استان های جنوبی کشور مانند هرمزگان، کرمان و فارس می باشد. بیماری جاروک لیموترش ناشی از candidatus "phytoplasma aurantifolia" از عوامل جدی و بسیار خطرناک لیمو ترش و دیگر مرکبات حساس در مناطق جنوبی ایران و کشور های حاشیه خلیج فارس می باشد. این بیماری محدود به آوند آبکش بوده و کنترل آن فوق العاده مشکل می باشد. تاکنون فقط روش هایی مثل اقدامات قرنطینه ای، استفاده از ارقام مقاوم یا متحمل، کنترل علف های هرز و کنترل ناقل یا ناقلین احتمالی در منابع آلوده، برای مدیریت بیماری توصیه شده است. سورفکتین یکی از مهمترین آنتی بیوتیک هایی می باشد که بوسیله باکتری گرم مثبت bacillus subtilis تولید می شود. این لیپوپپتید باکتریایی دارای خواص ضد قارچی، ضد باکتریایی، ضد ویروسی، و ضد مایکوپلاسمایی می باشد.در این بررسی پس از شناسایی و استخراج سورفکتین از سویه بومی با توان تولید بالای سورفکتین، اثر سورفکتین جهت کنترل جاروک لیمو ترش،مورد ارزیا بی قرار گرفت. بدین منظور میزان کمی تولید سورفکتین با 10سویه با استفاده از آنالیز hplc،مورد بررسی قرار گرفت و جدایه a28bبا میزان تولید 2/1گرم در لیتر،به عنوان جدایه برتر برای تولید سورفکتین انتخاب شد وپس از بهینه سازی پروتکل استخراج در حجم بالا،میزان 6/2گرم سورفکتین از حجم 4لیتر ،تولید شد.پس از آن نهال های آلوده به فیتوپلاسمای عامل جاروک با استفاده از غلظتهای متفاوت سورفکتین وتتراسایکلین تیمار شد ومیزان کمی فیتوپلاسما،در نهالهای آلوده قبل و زمانهای متفاوت بعد از کاربرد تیمار با استفاده از تکنیکreal-time pcr با استفاده از آغازگر های اختصاصی پروتئین غشائی فایتوپلاسمای همراه جاروک لیمو ترش ،تعیین شد. آنالیز نهایی داده ها توسط مقدار عددی سیکل آستانه (ct) و بر پایه آزمایش فاکتوریل در قالب طرح کاملا تصادفی نامتعادل صورت گرفت ونشان داد که از نظر اماری تفاوت معنی داری در سطح ا%بین غلظت های مختلف وجود دارد.همچنین تفاوت معنی دار در سطح 1% بین زمانهای مختلف دیده شد. مقایسه میانگین دو عامل زمان وغلظت با روش چند دامنه ای دانکن نشان داد که زمانهای 2ماه و3ماه پس ازکاربرد تیمارها،اختلاف معنی داربا زمان های دیگر دارد،همچنین تفاوت معنی دار بین غلظت های مختلف با شا هد وجود دارد این امر نشان د هنده این است که همه تیمارهای به کار برده شده، جمعیت فیتوپلاسما راکا هش داده است و در زمان های 2 ماه و3ماه پس از کاربردسورفکتین وتتراسایکلین، کا هش قابل توجهی در جمعیت فیتوپلاسما دیده شد.